Воскресенье, 24.11.2024, 04:12 | Главная | Регистрация | Вход |
Статистика
Онлайн всего: 1 Гостей: 1 Пользователей: 0
|
Статьи
В категории материалов: 13 Показано материалов: 1-10 |
Страницы: 1 2 » |
Сортировать по:
Дате ·
Названию ·
Комментариям ·
Просмотрам
Всякое живое
существо по большинству своих признаков сходно со своими предками. Сохранение
специфических свойств, т.е. постоянство признаков в ряду поколений, называют наследственностью.Изучением
передачи признаков и закономерностей их наследования занимается генетика. Каждому
признаку в качестве носителя информации соответ ствует определенный ген. Еще
во времена классической генетики иссле дователи пришли к выводу, что гены
находятся в клеточном ядре. Тогда же было установлено, что они должны
располагаться в линейном порядке. Долгое время считали, что наследственная
информация связа на с белковыми компонентами нуклеоплазмы. Лишь после успешных
экспериментов по передаче наследственных признаков с помощью ДНК генетики
пришли к убеждению, что именно ДНК, входящая в состав хромосом у всех
организмов, служит материальным носителем наследственной информации. Сначала
на насекомых, а затем на микроорганизмах было показано, что проявление
признаков зависит от активности ферментов. У микроорганизмов ферменты можно
было свя зать с конкретными признаками, поддающимися точному биохимиче скому
определению. Гипотеза один ген-один фермент гласит, что опре
деленный ген содержит информацию, необходимую для синтеза определенного
фермента (позднее была принята более точная формули ровка: каждый структурный
ген кодирует определенную полипептид ную цепь). Изменение гена вследствие
мутации приводит либо к утрате фермента, либо к изменению его свойств, а тем
самым и к изменению признака. Гены выявляются только благодаря мутациям.
Генетический анализ основан прежде всего на изучении различий в признаках,
опреде ляемых альтернативными формами (аллелями) того или
иного гена. По этому исследование различных генетических проблем ведется на
мутан тах. |
Репликация
ДНК. У бактерий, так же как и у высших организмов, носи телем
генетической информации служит ДНК. Рассматривая структуру клетки, мы уже
говорили о том, что бактериальная ДНК представляет собой двойную спираль,
замкнутую в кольцо. Сразу же возникает во прос: как сохраняется наследственная
информация при росте и размно жении клеток? Перед их делением происходит идентичная
редупликация,или репликация, генов. Этот процесс можно
удовлетворительно объяс нить, исходя из модели структуры ДНК, предложенной
Уотсоном и Криком, и из механизма удвоения ДНК, теперь уже известного. Две цепи двойной спирали ДНК комплементарны друг другу. На каждой цепи из
структурных элементов ДНК-дезоксирибонукле-озидтрифосфатов-синтезируется новая
цепь; при этом с каждым из ос нований спаривается комплементарное ему
основание, так что каждая из двух новых цепей опять-таки будет комплементарна
родительской цепи. Обе новые двойные спирали состоят из одной родительской и
одной вновь синтезированной цепи. Эта точная репликация ДНК га рантирует
сохранение генетической информации. |
Представление
о том, что и у микроорганизмов возможны скачко образные изменения
наследственных признаков-мутации,-утвержда лось лишь с трудом. До разработки
метода чистой культуры многие ученые (Нэгели, Цопф) думали, что у бактерий
морфология и физиоло гические свойства чрезвычайно изменчивы. Считалось, что
большое чис ло бактерий, встречающихся в природе, представляют собой разные
стадии жизненного цикла небольшого количества видов (плеоморфизм). Возражая
против этого на основании результатов, полученных с по мощью
усовершенствованных методов и чистых культур, другие ученые выступили в пользу
теории мономорфизма, согласно которой бактерии можно различать
и классифицировать, исходя из постоянства их морфо логических и физиологических
признаков. Необходимо было научиться различать и у бактерий генотип и фенотип. Генотипом называют
сово купность наследственных задатков клетки; ему противопоставляют фенотип - совокупность наблюдаемых признаков. Фенотипическое проявле ние одного и
того же генотипа может быть различным в зависимости от условий среды. |
Спонтанные мутации В популяции бактерий без всякого экспериментального вмешательства регулярно возникают мутации; такие мутации называют спонтанными мутациями, а клетки, в которых они возникли,-спонтанными мутантами. Мутагенное действие аналогов оснований ДНК (см. ниже) указывает на возможные причины спонтанных мутаций: вероятно, речь идет о случайных ошибках при включении нуклеотидов во время репликации ДНК-ошибках, вызванных таутомерным перемещением электронов в основании. Тимин, например, обычно находится в оксо-форме, в кото рой он образует водородные связи с аденином. Но если тимин во время спаривания оснований при репликации ДНК переходит в енольную форму, то он спаривается с гуанином. В результате в новой молекуле ДНК на том месте, где раньше находилась пара А-Т, появляется пара G-C. |
На обычных твердых средах лишь немногие мутации можно непосред ственно обнаружить по изменению пигмента, измененному росту коло ний или иным признакам. Некоторые мутантные признаки выявляются при добавлении индикаторов или красителей. Для идентификации му тантов, отличающихся от родительских клеток пониженными или повы шенными требованиями к питанию, приходится сравнивать рост тех и других на двух средах. Если, например, мутант утратил способность к синтезу лейцина, которой обладали клетки родительского (дикого) ти па, то он будет расти только на той среде, к которой добавлена эта аминокислота. Мы называем такого мутанта ауксотрофным по лейцину, т.е. нуждающимся в лейцине (1еи~), а также дефектным по лейцину, противопоставляя ему прототрофный дикий тип (leu +). Если в клеточной суспензии присутствуют одновременно и мутантные клетки leu ~, и про-тотрофные клетки дикого типа, то эти два типа можно различить по росту на двух разных средах. Метод, обычно применяемый для выявле ния таких дефектных. |
У эукариотических организмов в процессе оплодотворения объединяют ся гаплоидные наборы генов и образуется диплоидная зигота. В дочер нем диплоидном организме после немногих или же многократных ми-тотических делений в процессе редукционного деления (мейоза) происходит перекомбинирование хромосом, принадлежавших двум ро дительским наборам, и снова образуются клетки с гаплоидными наборами генов (гаметы). Такому половому способу «перетасовки» генетиче ского материала противопоставляют парасексуальные процессы, к которым относится и рекомбинация признаков у прокариот. Бактерии почти всегда гаплоидны; у них имеется только один набор генов. Зи готы образуются и у бактерий, но они никогда не бывают продуктом объединения целых клеток. Как правило, из клетки-донора в клетку-ре ципиент переносится лишь часть генетического материала, т.е. обра зуется неполная зигота (мерозигота). Хромосома реципиента спаривает ся с фрагментом хромосомы донора, и они обмениваются отдельными участками. При последующем делении ядра и клетки возникает клетка, содержащая только рекомбинированную хромосому (рис. 15.11). |
В настоящее время известны по меньшей мере три разных механизма рекомбинации попавшей в бактериальную клетку чужеродной ДНК с бактериальной хромосомой (или с плазмидой) in vivo: 1) общая гомо логичная рекомбинация, 2) сайт-специфическая рекомбинация и 3) него мологичная рекомбинация. Общая гомологичная рекомбинация. В этом случае поступившая из вне ДНК рекомбинируется с клеточной ДНК путем реципрокного обме на соответствующими участками. Если не считать различий, обусло вленных мутациями, партнеры по рекомбинации должны иметь одинаковую нуклеотидную последовательность, т. е. быть максимально гомологичными. Гомологичная рекомбинация находится под контро лем гена гее А; мутанты с дефектом этого гена (гее ') не способны к го мологичной рекомбинации. Существует несколько моделей данного механизма. Предполагают, что спаривание оснований происходит между деспирализованными, одноцепочечными участками двух двойных цепей ДНК. Вторая цепь, возможно, образуется в результате репликации или репарации. Сайт-специфическая рекомбинация. Этот процесс осуществляется не зависимо от гомологичной рекомбинации, т.е. возможен и у мутантов гее ~. Он состоит в том, что короткая двухцепочечная ДНК встраивает ся в определенном месте в длинную двойную спираль; при этом мень ший партнер теряет свою автономность. Типичным примером сайт-спе цифической рекомбинации может служить интеграция бактериофага лямбда (к) (рис. 4.14). Генетические эксперименты свидетельствуют о том, что фаг при переходе в состояние профага включается в хромосому клетки-хозяина в определенном месте-между да/-опероном и биотиновой областью (рис. 15.12). Включению фага предшествует его присоединение к опреде ленному участку бактериальной ДНК. Ранее считали, что оно опреде ляется высокой степенью гомологии нуклеотидных последовательно стей, однако эта гомология оказалась незначительной; по-видимому, большую роль здесь играет кодируемый фагом белок-так называемая интеграза. В определенном участке фаговой ДНК (att В) и в соответствующем участке бактериальной ДНК (att X) этот белок катализирует разрыв и перекрестное воссоединение геномов фага и клетки-хозяина. |
Перенос генетического материала путем прямого контакта между дву мя клетками называется конъюгацией. Уже давно на основании морфо логических данных предполагали, что и у бактерий может происходить своего рода спаривание; однако только эксперименты с множественны ми мутантами бесспорно доказали, что и у бактерий возможна передача генетического материала при прямом межклеточном контакте. В 1946 г. Ледерберг и Татум провели решающий опыт с двумя мутантами Е. coli К12, каждый из которых был ауксотрофным по двум различным ами нокислотам (рис. 15.14). Один двойной мутант нуждался в аминокисло тах А и В, но был способен синтезировать С и D (А ~ В ~ С * D+); другой мутант был ему комплементарен (А т В т С~ D"). Эти мутанты не росли на минимальной питательной среде и не обра зовывали колоний. Однако если на ту же минимальную среду высевали смесь суспензий обоих мутантов, то колонии появлялись. Клетки этих колоний обладали наследственной способностью синтезировать все аминокислоты, т.е. принадлежали к типу A + B + C + D+ (были прото-трофными). Такие клетки возникали с частотой 1 :10б; это были генетические рекомбинанты - они объединяли в себе генетическую информацию двух реципрокно дефектных (взаимодополняющих) родительских кле ток. Использование в качестве исходных штаммов множественных му тантов исключало возможность появления ревертантов, так как вероят ность одновременной реверсии по двум генам составляет величину по рядка 10~14-10~16 на генерацию. Необходимой предпосылкой реком бинации служил прямой контакт родительских клеток. |
Трансдукцией называют передачу ДНК от клетки-донора клетке-реци пиенту при участии бактериофагов. Обычно при этом фаг переносит лишь небольшой фрагмент ДНК хозяина. Различают два вида трансдукции: неспецифическую (общую), при которой может быть перенесен любой фрагмент ДНК хозяина, и специфическую, затрагивающую лишь строго определенные фрагменты ДНК. При неспецифической трансдук-ции ДНК клетки-хозяина включается в частицу фага либо дополнитель но к его собственному геному, либо вместо него, тогда как при специфической трансдукции некоторые гены фага замещаются генами хозяина. В обоих случаях трансдуцирующие фаги, как правило, де фектны - например, они часто теряют способность лизировать клетку-хозяина. Передача признаков путем трансдукции была обнаружена у многих бактерий, в том числе у видов Salmonella, Escherichia, Shigella, Bacillus, Pseudomonas, Staphylococcus, Vibrio и Rhizobium. Но не все фаги могут осуществлять трансдукцию, и не во все бактерии таким путем может быть перенесена ДНК. |
Бактериофаги, как правило, проявляют специфичность в отношении хо зяев: они инфицируют только один штамм бактерий или ограниченное число родственных штаммов, видов или родов бактерий. В основе этой специфичности лежат прежде всего рецепторные свойства поверхности бактериальных клеток. |
|
| |