Клеточная
стенка, по-видимому, ответствен на также за окрашивание по Граму. Способность
или, наоборот, неспособность окрашиваться в темно-фиолетовый цвет при
использовании метода, предложенного в 1884 г. Грамом, служит важным таксономическим
признаком, с которым коррелируют другие свойства бактерий. Процедура
окрашивания по Граму начинается с обработки фиксированных бактериальных клеток
основным красителем кристаллическим фиолетовым. Затем следует обработка
раствором йода. Йод образует с кристаллическим фиолетовым комплекс,
нерастворимый в воде и плохо растворимый в спирте и ацетоне. После этого клетки
«дифференцируют», обрабатывая их спиртом: грам-положительные клетки удерживают
при этом комплекс краситель - йод и остаются синими, а грам-отрицательные
обесцвечиваются. Для того чтобы сделать их видимыми, их дополнительно
окрашивают контрастным красителем фуксином.
Если после
окрашивания по Граму обработать грам-положительные клетки лизоцимом,
протопласты остаются окрашенными, однако под действием спирта они
обесцвечиваются. Прорастающие споры Bacillus subtilis и первые
генерации клеток после прорастания спор ведут себя как
грам-отрицательные организмы. Лишь позднее
они становятся грам-положительными. Эти наблюдения показывают, что
окрашивающий комплекс находится в протопласте или на его поверхности и что у
грам-положительных бактерий его удерживает главным образом клеточная стенка,
которая препятствует его экстрагированию.
| 
