Microbiology

Классификация возбудителя.

Род: Leptospira
Вид: L. interrogans
В инфекционной патологии животных наибольшее значение имеют серогруппы: Pomona, Tarassovi, Hebdomadis, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola.

Лептоспироз - инфекционная природно-очаговая болезнь животных и человека, характеризующаяся кратковременной лихорадкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, геморрагическим диатезом, некрозом слизистых оболочек и кожи, атонией органов пищеварения, абортами. Может протекать бессимптомно.

Восприимчивые животные.

Ниболее восприимчивы крупный рогатый скот, свиньи, лисицы, песцы, менее - лошади, козы, овцы, буйволы, верблюды, олени, ослы, собаки, кошки, куры. К экспериментальному заражению наиболее чувствительны золотистые хомячки, крольчата-сосунки и молодые морские свинки. Основными носителями лептоспир в природных очагах являются грызуны.Лептоспирозом болеет и человек.

Патогенез и факторы вирулентности:

• основной фактор передачи болезни – вода;
• входными воротами инфекции являются поврежденные кожа и слизистые оболочки;
• лизис лептоспир сопровождается выходом эндотоксинов, под действием которых повышается проницаемость сосудов, лизируются эритроциты, происходят кровоизлияния, развиваются гематурия и желтуха, поражается нервная система. Токсикоз может привести к гибели животного;
• ферменты патогенности: гемолизин, фибринолизин, плазмокоагулаза, гиалуронидаза, липаза, лецитиназа.

Методы диагностики.

1. Бактериологическая диагностика.
   1. Материал для исследования:
      кровь, моча, кусочки паренхиматозных органов, почка, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с содержимым, абортированный плод. Патологический материал отбирается не позже 2 ч после гибели животного. Моча в летнее время исследуется в течение 3 ч.
   2. Микроскопия.
      1. методы окраски:
         лептоспиры плохо окрашиваются анилиновыми красителями, по Романовскому-Гимзе – красные, также лептоспир можно обнаружить в срезах из органов после импрегнации серебром по методу Левадити.
      2. микрокартина:
         микроскопию проводят в раздавленной капле с конденсором «темного поля». Лептоспиры - спиралевидные бактерии диаметром 0,1-0,25 и длиной 6-30 мкм, образующие около 20 мелких, тесно расположенных первичных завитков и 1-2 вторичных, придающих клетке форму букв Г, S, С. В темном поле они имеют вид тонких, серебристых нитей с утолщенными и загнутыми в виде крючков концами.
      3. грамотрицательны;
      4. спор не образуют;
      5. капсул не образуют;
      6. активно подвижны.
   3. Культивирование.
      1. посев на питательные среды: Уленгута, Терских, Ферворта-Вольфа, Любашенко и др.;
      2. особенности выделения возбудителя:
         • факультативные анаэробы;
         • оптимальная температура 28-30^oС;
         • срок культивирования от 7 дней до 1-2 мес.
      3. культуральные свойства:
         - при культивировании среда не изменяется, и наличие роста определяют микроскопией в темном поле. На плотных средах (Кокса, ВГНКИ) образуют колонии S-, О- и R-форм. S-форма - типичная вирулентная, ее колонии прозрачные, в виде диска с ровным краем.
      4. биохимические свойства:
         ферментация углеводов не доказана; обнаружены каталаза, оксидаза, липаза и др.
   4. Биопроба.
      Заражают золотистых хомячков 20-30-дневного возраста и крольчат-сосунов в возрасте 10-20 дней. На каждую пробу берут двух животных; на 4-5-й день убивают первого, на 14-16-й день - второго. Из сердца, печени и почек убитых или павших животных проводят посевы.
   5. Устойчивость.
      В воде открытых водоемов патогенные лептоспиры сохраняются от 7 до 30 дней и более; в почве, перенасыщенной водой, выживают до 280 дней; в свежем молоке - 8-24 ч; в почках убойных животных при температуре 0-4^oС - до 28 дней; в замороженном мясе погибают через 10 дней. В засоленном (4,8 % NаСl) мясе крупного рогатого скота погибают через 10 дней; в гипертоническом растворе поваренной соли (2,8 %) - через 15 мин.При кипячении погибают моментально, при 56-58^oС - в течение 25-30 мин. Быстро гибнут при высушивании и под воздействием прямого солнечного света. Растворы (0,1 %-ный соляной кислоты, 0,5 %-ный фенола) инактивируют лептоспиры за 20 мин.
   6. Иммунитет и средства, специфической профилактики.
      После переболевания у животных формируется длительный и напряженный иммунитет, характеризующийся серовариантной специфичностью, поэтому возможны реинфекции. Отмечается также длительное лептоспироносительство и вследствие этого инфекционный иммунитет.При вакцинации коров за 1,5-4 мес, овец и свиноматок за 1,5-2 мес до родов колостральный иммунитет продолжается у телят до 2,5 мес, у ягнят и поросят - до 1,5 мес.
2. Серологическая диагностика.
   Используют реакцию микроагглютинации (РМА) и реакцию агглютинации (РА). Пробы крови берут на 5-7-й день болезни и при исследовании отдельных животных повторно через 7-10 дней.
   • РМА ставят в лунках агтлютинационных пластинок из плексигласа.Компоненты реакции:
     1. сыворотка в разведении 1:100, 1:500, 1:2500 (при необходимости реакцию ставят в разведениях 1:100, 1:200 и т. д. до титра) в объеме 0,1 мл;
     2. антиген - живые 5-15-суточные культуры лептоспир различных серогрупп в объеме 0,1 мл;
     3. контролем служит антиген с физиологическим раствором по 0,1 мл.

   Реакцию выдерживают при температуре 30 ^oС в течение 1 ч. Агглютинация проявляется в склеивании лептоспир и образовании «паучков», состоящих от 3-5 до нескольких десятков и более бактерий. Оценивается реакция в плюсах по 4-балльной системе. Положительной считают реакцию не менее чем два плюса при отсутствии агглютинации в контроле.

   • РА ставят на стеклянной пластинке.
     Компоненты реакции:
     1. исследуемая сыворотка в разведении 1:100;
     2. лептоспирозные антигены шести серогрупп.

     Оценка результатов производится в плюсах по 4-балльной системе. Положительной считают реакцию в два плюса и выше, сомнительной - в один плюс.

   • Для выявления лептоспир в крови, моче, паренхиматозных органах, в тканях абортированного плода, в воде и почве предложен иммуно-флюоресцентный метод.
     
3. Аллергическая диагностика:
   не применяется.
4. Биопрепараты для специфической профилактики:
   депонированная поливалентная вакцина ВГНКИ против лептоспироза животных. Иммунитет после вакцинации наступает через 14-20 дней и длится у молодняка до 6 мес, у взрослых животных - до 1 года.
5. Биопрепараты для специфической терапии:
   иммунная выворотка против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных. Иммунитет сохраняется 10-14 дней.